懿玄
作文一：《玻璃珠_700字》700字
小时侯喜欢玻璃珠，亮晶晶的，无论被我玩得怎么脏，只要用清水一洗，仍旧很漂亮；现在长大了，依然是喜欢。的确，水晶比它高贵，比它夺目，但，那只属于有钱人家的孩子，我不配拥有。于是我握着我的玻璃珠，对着阳光微笑。 ＮＯ。１ “她很优秀，”我的老师们这样评价我，“十分上进，很要强。”我望着他们，嘴角上扬，不是因为高兴，而是嘲笑。我了解自己，我是最不想争夺的，只是在一年级时不小心考了第一，从此一发不可收拾，愈陷愈深。我对好友罗烂说：“我累死了，这次考试我故意考砸好不好？”她转过头，缓缓地说：“你真的可以放得开么？”我吃惊地望着她，看着她笑得比菊花还灿烂，她接着说：“好啊，那么没人跟我争了，回家可以用成绩单讹钱了。”我也跟着笑，直到她过来狠拍我的背。 ＮＯ。２ 我有一个哥哥，比我大一岁多一点。哥哥长得很好看，他拥有精致的五官，白皙的皮肤，打得一手好球，并且成绩也是相当得好。更重要的是，奶奶爱他。奶奶不喜欢我，因为我是女孩子。我经常听说奶奶的种种，好的坏的都有，听过之后，不会有任何的感觉，因为我对她已经从心底里疏远。我不恨奶奶，不恨哥哥，不恨任何人。我已经学会了顺从，学会了听天由命。 ＮＯ。３ 我很喜欢＞，喜欢主人公越前龙马，那样一个可爱的孩子。他有好看清秀的眉眼，在女生面前永远都是酷酷的，会在学长面前耍小孩子脾气，会在非共开场合将对手打得一败涂地事后却很无辜的说“我认识你吗”。别人说他很自负，我也认为是，但这就是他的可爱之处。我一直一直都很自卑，可是看着他在球场上奔跑的样子，我就会重拾信心。 结尾 我的玻璃珠是由我的心情汇集而成的，也许有一天，我会把它们都锁在心房，不小心再打开的时候，它们会在阳光下歌唱，闪出水晶的光彩。
作文二：《平板涂布玻璃珠》500字
平板涂布玻璃珠
涂布玻璃珠（?４ｍｍ）提供一个有效且容易的方法来实现琼脂平板的最佳涂板。玻璃珠来回轻轻滚动，使得大肠杆菌溶液（或任何细菌、真菌溶液）涂布在平板的任何角落。可以堆叠多个还有玻璃珠的平板，同事晃动来涂板。玻璃珠可以重复使用，即使用过后用７０％乙醇洗涤，然后高压灭菌与烘箱干燥。
平板涂布玻璃珠特色：
?
?
?
? 提高转化效率 快速同步涂板 经济性１瓶可用于１００－１５０个平板 灭菌后可重复使用
平板涂布玻璃珠使用：
ＨＩＴ感受态细胞涂板：当吸入５０－１００μＬ转化细胞至每个９０ｍｍ平板上时，快速加入１０－２０个玻璃珠，晃动平板来回滚动珠子，然后改变方向再晃动几次，以确保菌液均匀涂布在培养基表面。当表面的琼脂开始干燥（２０－４０秒）后倒出玻璃珠，准备孵育。
相关培养基配置：ＬＢ 用于一般的用途，扩增细菌。
? Ｓｕｐｅｒ Ｏｐｔｉｍａｌ Ｂｒｏｔｈ （ＳＯＢ ｍｅｄｉｕｍ） 强化了营养物质，用于在转染后增加转染效率。 ＳＯＢ培养基，是在ＬＢ培养基的基础上开发的，用来培养Ｅ．ＣＯＬＩ的富含营养的培养基，在质粒转化细菌时，使用ＳＯＢ复苏电转化或化学转化的感受态细胞，可以提高转化率。
? Ｓｕｐｅｒ Ｏｐｔｉｍａｌ ｂｒｏｔｈ ｗｉｔｈ Ｃａｔａｂｏｌｉｔｅ ｒｅｐｒｅｓｓｉｏｎ （ＳＯＣ）。是ＳＯＢ加入葡萄糖以抑制分解代谢，增加生长速度。
常用培养基配制方法：
?
作文三：《夹玻璃珠比赛》600字
夹玻璃珠比赛
石岐中心小学 刘玟君
今天，我们中大园玩了一场夹玻璃珠比赛。
第一位，是我们的钰韬同学，他大摇大摆，胸有成竹地走上来。老师说：“游戏开始！”只见他手拿着筷子，在玻璃珠里左夹右夹，玻璃珠就像调皮的孩子，在跟他玩躲猫猫呢。夹呀夹呀，他好不容易地夹起一颗珠子，身子往前一倾，飞快地转过身，快到另一个盆子了。同学们非常兴奋。只见他把玻璃珠用力一扔，珠子又不听话的掉在地上，同学们一片叹息声。这时他有点心灰意冷了，当他转身时无意中看了一下黑板，第一名有五个贴纸，这时他好像注入了一股神奇的力量，又忍不住转过身去，夹第二颗珠子，终于他夹起第二颗珠子，这次他小心地走着，眼睛一动不动地注视着珠子，飞快地跑过去。第二颗珠子，进去啦！同学们一阵欢呼。之后他一连串夹了六个，很不错。
第二位是我，害怕失败的我很不情愿地上了台，不管老师说什么，我先练习。游戏开始了，我急忙地夹着一颗颗像涂了油的小珠子。那些蹦蹦跳跳的小珠子，我可不想跟他们玩游戏。我夹起一颗珠子小心翼翼地走着，“砰”，珠子掉下来，我没有气馁。第二颗也没有成功。我好不容易夹起一颗珠子，这次成功了！我一连夹了三个。小黄同学也不错。也夹了六个。
在欢笑声中，我们结束了这场游戏。
指导：王萼先
作文四：《夹玻璃珠比赛》400字
夹玻璃珠比赛
市内 小三 徐喆睿
今天下午，我们作文班玩了一次夹玻璃珠比赛。
李老师首先把我们分成六个组，每组三人。接着给我们讲了比赛规则：每个组各有１０颗玻璃珠，每个组三名同学依次用筷子将玻璃珠从一个碗里夹进另一个碗里，最先夹完的一方获胜。同学们都非常兴奋，只等老师的一声命令。
比赛开始了。我第一个上场，很紧张，拿着筷子小心翼翼地去夹珠子，哟，出乎我的意料，我竟然一下子就把玻璃珠夹起来了，我高兴极了。剩下的九颗珠子，我都稳稳地夹住放进空碗里，算是首战告捷。邓印一组也不示弱，尽管他们没什么经验。你看邓印，为了夹起珠子，屏住呼吸，可小珠子就是不听他的话，像跟他捉迷藏似的，东躲西藏的，总是不让他夹起来。他的脸憋得通红，豆大的汗珠不停地往下掉，把同学们逗得哈哈大笑。啦啦队不断地位邓印加油，声音此起彼伏，一浪高过一浪，终于他不负重托，费了九牛二虎之力把１０颗珠子送进了另一个碗里。我组的三个同学眼疾手快，以远超邓印一组的成绩赢得了这次比赛的胜利。 在欢笑声中，我们结束了这场比赛。
作文五：《玻璃珠选形器》2100字
ＩＣＳ ９３（ｏｆ｝ｏ（９９
９６ Ｐ 备案号 ＪＴ
中华人民共和国交通行业标准
玻璃珠选形器
ｓｅｌｅｃｔｏｒ ｏｆ ｂｅａｄｓ Ｓｈａｐｅ ｇｌａｓｓ
２００７—０４—０３发布 ２００７（０８—０１实施
中华人民共和国交通部发布
目 次
前言 ？（（
１范围 ｔ
２规范性引用文件
３术语和定义 ？
４技术要求 ？
５试验方法 ？
６检验规则 ？ ｛ｉ，‘１‘７标志与包装 ？
Ｉ
前 言 本标准由交通部科学研究院提出。 本标准由全国交通工程设施（公路）标准
ＴＣ２２３）归口。 本标准起草单位：交通部科学研究院。 化技术委员会（ＳＡＣ，
本标准主要起草人：熊才启、周正鸣。
？
玻璃珠选形器
１范围
本标准规定了（测定道路交通标线用玻璃珠成圆率的玻璃珠选形器的技术要求、试验方法、检验规则 和标志与包装。
本标准适用于为测定道路交通标线用玻璃珠的成圆率所使用的玻璃珠选形器。 ２规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
ＧＢ，Ｔ ６３１５游标万能角度尺
ＧＢ，Ｔ ９０５６金属直尺
ＪＢ，Ｔ ６８２６ 压电式振动测量仪技术条件
４４６ 彤Ｔ 路面标线用玻璃珠
３术语和定义 下列术语和定义适
用于本标准。 ３（１ｓｅｌｅｃｔｏｒ ｏｆ ｂｅａｄｓ玻璃珠选形器ｓｈａｐｅ ｇＪａｓｓ
将圆玻璃珠与有缺陷的玻璃珠分离的装置。
３（２
玻璃珠成圆率ｒｏｕｎｄｎｅｓｓ ｏｆ ｂｅａｄｓ ｇｌａｓｓ
一批玻璃珠ｑｔ，圆玻璃珠的质量Ｉｊ玻璃珠总质最的百分比。
４技术要求
玻璃珠选形器？１玻璃平板、振动器、调节器和台架等部件组成。
４（１外观要求 玻璃珠选形器的外部表『酊小应有影响使用性能的锈蚀、碰伤、划痕、裂纹等明显
外观缺陷。
４（２性能要求
４（２（１玻璃平板的长乘宽尺寸为（３８０ｒｒｍ，？２ｍｍ）×（１５０ｍｍ？２ｍｍ）。玻璃平板与水平珀ｆ之问的夹角在 ｏｏ，５。之间町调。
４（２（２振动器可使玻璃平板产生频率为５０Ｈｚ？２Ｈｚ的振动。通过振幅调节器，振幅应在０。Ｏ（５ｍｍ之 间可调。
４（２（３玻璃珠选形器对同一批玻璃珠样品进行承复性分离，同一批玻璃珠样品成圆率最大值与最小值 相差应不大于５，
５试验方法
５（１试验环境条件 试验时环境温度为２３。Ｃ？２。Ｃ；环境相对湿
度为５０，？５，。
１
５（２试验设备 试验所使用设备如下：
ａ）金属直尺：符合ＧＢ，Ｔ ９０５６规
定；
ｂ）游标万能角度尺ｔ符合ＧＢ，Ｔ ６３１５中游标读数值为５’的规定：
ｃ）振动测量仪：符合ＪＢ，Ｔ ６８２６规定。
５（３外观
用目测和手感进行检查，应符合４（１的要求。
５（４玻璃平板长宽尺寸
用金属直尺对玻璃平板长宽尺寸进行测鼍，应符合４（２（１的要求。 ５（５玻璃平板与水平面的夹角
用游标万能角度尺调平玻璃平板后，对玻璃平板与水平面的夹角进行测量，应符合４（２（１的要求
５（６玻璃平板的振动频率和竖向振幅
用振动测量仪对玻璃平板的振动频率和竖向振幅进行测量，应符合４（２（２的要求。 ５（７玻璃珠选形器重复性检测
按？Ｔ ４４６中成圆率检测方法，同一选形器使用同一批玻璃珠样品，在同一夹角、同一频率、同一
振幅的条件下（至少进行３次成圆率检测，应符合４（２（３的要求。
６检验规则
６（１检验分类
检验分型式检验和出厂检验。
６（２型式检验
６（２（１有下列情况之一时，应进行型式检验：
ａ）新产品定型或产品转产鉴定时；
ｂ） 正式生产后，如果重要结构、材料、工艺有较大变更，可能影响产品性能时；
ｃ）产品停产半年以上，重新恢复生产时；
ｄ）进口产品首台引进使用前；
ｅ） 国家质量技术监督部门和行业管理部？提出型式检验时。 ６（２（２型式检验按表１规定的项目进行。
６（３出厂检验
每一产品出厂前，均应按表１规定的项目进行出厂检验。检验合格后应出具产品合格证。
表１检验项
目 序号 检验项目 型式检验 出厂检验 １ 外观 玻璃平板长宽尺寸 ２
３ 袁璃平板与水平面的夹角 ４ 玻璃平板的振动频率和竖向振幅 玻璃珠选形器重复性检测 ５
注：“＋”表示检验项目。
７标志与包装
７（１在玻璃珠选形器壳体适当位置应有制造厂厂名、产品名称、型号和生产日期等。 ２
７（２玻璃珠选形器应妥善包装，包装箱内应附有产品合格证。
７（３不得因包装不善在运输过程中损坏。
３
作文六：《玻璃珠的用途》600字
玻璃珠的用途
（２００９－０７－３０ １３：３４：２４）
转载
标签： 分类： 喷砂工艺
玻璃珠
道路标线
折射率
杂谈
玻璃珠的用途
１、道路用玻璃微珠主要应用于常温型及热熔型道路标线涂料中。分预混及面撒两种，预混型玻璃微珠可在生产热熔型道路涂料时混在涂料中，可以保证道路标线在寿命期限内长期反光。另一种可在道路标线施工时撒布在标线表面上起到即时反光效果。
经过表面处理的镀膜玻璃微珠，在道路标线施工中使用，可极大的提高玻璃微珠与热熔标线的附着力，增强道路标线的折射率，并且有自洁、抗污、防潮等使用。道路用玻璃微珠用于改善路面涂料逆反身性能，提高司机夜间行车的安全性。
２、用于工业喷丸及添加剂作用的玻璃微珠可在金属表面及模具表面上，既不损坏工件表面，又提高工件的精度。用于五金金属、塑料、首饰、精密铸造等物件的清理与抛光。是国内外普遍使用的高档精加工材料。
３、玻璃微珠还在医疗器械及尼龙、橡胶、工程塑料、航空等各领域作为一种新型的材料被广泛的使用。如作填加剂、增强剂等。
４、工艺品专用玻璃珠、玻璃砂以及彩色玻璃微珠，是服装印花、服装烫画 ， 圣诞树表面装饰、人造水果、人造花卉工艺品表面装饰、制造沙漏流沙的理想材料！
５、高折射率玻璃微珠是反光织物、反光涂料、化工涂料、广告宣传材料、服饰材料、反光膜、反光布、反光标牌标识、机场跑道、鞋帽、书包、水陆空救生用品、夜间活动人员穿着等产品的必需材料。
玻璃微珠的用途非常广泛，随着社会的发展在不断地扩大使用范围，我公司可根据客户的具体需求生产供应！
作文七：《喷丸玻璃珠应用》400字
喷丸玻璃珠应用
在众多的供应玻璃微珠中喷丸玻璃微珠的应用是很广泛的，那么为什么它的应用会如此广泛呢？或许就取决于以下几点：
１、喷丸供应玻璃微珠是一种软硬兼备的产品—采用的是优质材料生产而成，并且拥有一定的机械强度，ｓｉｏ２ 含量大于等于６８，硬度可达６－７莫氏，而且它具有足够的弹性，可反复使用多次，不易破碎。所喷器件效果基本上相同，比普通玻璃珠的使用寿命长大概３倍以上。
２、喷丸供应玻璃微珠均匀度极好—成圆率大于等于８０，粒度均匀。使用过后使喷砂器件各处亮度系数保持均匀，不易留下水印。
３、喷丸供应玻璃微珠是不可替代的—喷丸玻璃珠作为一种研磨材料比其他任何研磨材质具有以下优越性除了金属研磨材料外，比其他任何介质使用时间都要长，是用非碱性钠钙玻璃材料制成，具有良好的化学稳定性并且不会污染加工的金属。在加速清理的同时保持原物件的加工精度和亮度。
４、喷丸供应玻璃微珠光滑无杂质—外观为球状颗粒，表面光滑，无杂质，具有良好的光洁度，已经达到国际、国内标准水平。
来源：：／／ｋｓｂｌｚｐ．ｚｚ９１．／ｎｅｗｓ２３６２．ｈｔｍ
作文八：《国标-》玻璃珠选形器》4000字
忑墨ｊＧ
中华人民共和国交通部部门计量检定规程
玻璃珠选形器
中华人民共和国交通部发布
玻璃珠选形器
Ｖｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ
Ｓｅｌｅｃｔｏｒ ｏｆ Ｇｌａｓｓ Ｂｅａｄｓ Ｓｈａｐｅ
本规程经中华人民共和国交通部２００７年０４月０３日批准，并自２００７年０８
月０１日起施行。
归口单位：全国交通工程设施（公路）标准化技术委员会 主要起草单位：交通部科学研究院
本规程由全国交通工程设施（公路）标准化技术委员会负责解释
ＪＪＧ（交通）０７３－－２００７
本规程主要起草人： 周正鸣（交通部科学
熊才启 （交通部科研究院）
学研究院）
ＪＪＧ（交通）０７３－－２００７
目 录
１范围 一 ２引用文献 一 ３术语 一４概述 一
５计量性能要求 一 ６通用技术要求一 ｉ｝２７计量器具控制 一
５附录Ａ检定证书内容 一
６ ？？ 附录Ｂ检定证书内页格式
ＪＪＧ（交通）０７３－－２００７
玻璃珠选形器
１范围 本规程适用于玻璃珠选形器（以下简称“选形器”）的首次检定、后续检定和使用
中检
验。
２引用文献
本规程引用下列文献：
ＪＴ，Ｔ ４４６－－－２００１路面标线用玻璃珠 ＪＴ，Ｔ ６７４－－２００７玻璃
使用本规程时，应注意使用上述引用文献的现行珠选形器
有效版本。
３术语 ｓｅｌｅｃｔｏｒ ｏｆ ｂｅａｄｓ３（１玻璃珠选形器ｓｈａｐｅ ｇｈｅｓ
将玻璃珠样品中的圆玻璃珠与有缺陷的玻璃珠分离的装置。
ｏｆ ｂｅａｄｓ ３（２玻璃珠成圆率刑岫ｄＩ悯ｓ ｇＪａｓｓ
一批玻璃珠中，圆玻璃珠的质量占玻璃珠总质量的百分比。
４概述 选形器由玻璃平板（简称“平板”）、振动器、振动调节器和台架等部件组成。选形
器通
过振动装置带动与水平面具有适当夹角的平板以固定频率和适当振幅振动，使平板上圆的玻璃珠（简称“圆珠”）下滚到圆珠收集器中，有缺陷的玻璃珠（简称“不圆珠”）缓慢上移 并收集到不圆珠收集器内，从而将圆珠和不圆珠分离。选形器适用于路面标线用玻璃珠 的生产企业、用户和检测单位测定路面标线用玻璃珠的成圆率。
５计量性能要求
５（１平板振幅：通过调节器，可在０—０（５ｍｍ范围内调节。
５（２平板振动频率：５０Ｈｚ？２Ｈｚ。
５（３平板尺寸（长×宽）：（３８０？２）ｍｍ×（１５０？２）ｍｍ。
５（４平板角度：可在ｏ。一５０范围内调节。
５（５重复性要求：以路面标线用玻璃珠为试样，用选形器和天平对其成圆率进行重复性 测定，其结果极差不大于５，。
注：极差是一组数据中的最大值与最小值之差。
６通用技术要求
６（１标牌字迹清晰，标明设备名称、型号、出厂编号、制造厂商、生产日期等。 ６（２平板表面平滑，整机无明显缺陷和锈蚀。
６（３工作时振动平稳，无异常噪声。
１
ＪＪＧ（交通）０７３－－２００７
７计量器具控制
７（１检定条件
７（１（１环境条件 环境条件如下： ａ）
环境温度：２３０ｃ？２？； ｂ）环境
相对湿度：５０，？５，； ｃ）电
ｄ）电源源电压：２２０Ｖ？１０Ｖ；
频率：５０｝Ｉｚ？Ｉｌｋ；
ｅ）选形器周围无明显的干扰振源，无腐蚀气体，无强磁场干扰。 ７（１（２检定用设备 检定用设备如下： ａ）振动测量仪（测振仪）：位移测量范围宽
于０（５ｍｍ，相对误差不大于５，； ｂ）频率计：测量范围宽于４７Ｈｚ一５３Ｈｚ，
注：如测振仪具有测频率功能且满足ｂ）中要求，则频率计可相对误差不大于５，；
省。 ｃ）万能角度尺：分度值不大于５７； ｄ）长度测量器具：测量范围不小于
注：长度测量器具可以是卷尺、直尺、卡尺等。 ４００ｎｌｌｎ，分度值不大于ｌｍｍ；
ｅ）天平：分度值不大于０（１９。
７（２检定项目和检定方法
７（２（１检定项目 选形器的检定
项目见表１。
衰１检定项目一览表
首次检定 检定项目后续检定 使用中检验
通用技术要求
＋＋平板振幅
平板振动频率 ＋平板尺寸 ＋ ＋平板角度 ＋＋重复性要求
注：凡需检定的项目用“＋”表示，不需检定的项目用“一”表示
７（２（２检定方法
７（２（２（１通用技术要求检查 通过观察、操作、耳听和手感等检
查，应满足第６章的要求。
７（２（２（２平板振幅和平板振动频率检查 使平板基本
处于水平状态，启动设备至工作稳定。
２
ＪＪＧ（交通）０７３－－２００７
将振动调节器调至最小位置，测振探头置于振源附近的平板上。将调节器向振幅增 大方向缓慢调节，振幅测量值应随之增加，且调节应使振幅测量结果满足５（１的要求。
将测频探头置于振源附近的平板上，在同一位置测量频率三次，并取平均值，频率偏 差用公式（１）计算，测量结果应满足５（２的要求。
曲＝，一５０Ｉ－Ｉｚ （１）
式中：占广频率标称值５０Ｈｚ的偏差，Ｉ－Ｉｚ；
厂＿—一频率测量平均值，地。
７（２（２（３平板尺寸检查 用长度测量器具测量平板两宽边各一次，并取平均值；测量平板
两长边各一次，并取
平均值；偏差按公式（２）、公式（３）计算，测量结果应满足５（３的要求：
轧＝ｂ一１５０ｒａｍ （２）
（３） 吼＝Ｌ一３８０ｍｍ
式中：民——平板宽度参考值１５０ｒａｍ的偏差，ｍｍ；
艿Ｌ——平板长度参考值３８０ｍｍ的偏差，ｍｍ；
６——平板宽度的测量平均值，ｍｍ；
，——平板长度的测量平均值，ｍｉｌｌ。
７（２（２（４平板角度检查 使平板基本处于水平状态，用万能角度尺测量此时的平板角度
作为初值。调节平板
角度并用万能角度尺测量，以测量值减初值作为平板角度变化值，变化值应满足５（４的要 求。
７（２（２（５重复性要求检查
按ＪＴ，Ｔ ４４６－－２００１的６（１和６（５规定的方法对同一路面标线用玻璃珠样品的成圆率 进行三次重复性测定。测定步骤如下：
ａ）随机抽取有代表性的整袋玻璃珠产品，将该袋玻璃珠倒入一容器中，然后再从这
个容器倒入另一个容器，如此重复三次，混合均匀的玻璃珠倒人两份分割器中重
复分割，最后得到约１ ０００９玻璃珠，作为样品；
ｂ） 用蘸有少许工业酒精的脱脂棉球清洁平板和玻璃珠收集器；
ｃ）用天平从玻璃珠试样中称取２０９样品，精确到０（１９； ｄ）开启选形器，调节平板的
ｅ）在平板上半部上方约１０ｍｍ斜度和振幅，致使平板上圆珠下滚，不圆珠缓慢上移；
处，用小勺慢慢往平板上喂适量玻璃珠，使玻璃珠不
在平板上堆积或大量滑落；待圆珠全部落入圆珠收集器中，并将滞留在平板上的
不圆珠收集到不圆珠收集器中后，再喂下批玻璃珠，直至样品分离完毕；
ｆ）把收集到的圆珠和不圆珠按步骤ｅ）分别进行再分离，直至“圆珠”中无不圆珠分
离出，和“不圆珠”中无圆珠分离出为止；
ｇ）用天平称出由步骤ｅ）、ｆ）得到的圆珠的质量？和不圆珠的质量ｃ，精确到０（１９；
玻璃珠成圆率用公式（４）计算：
（４） Ｐ＝盎
式中：Ｐ——玻璃珠成圆率，，；
１
ＪＪＧ（交通）０７３－－２００７
？——圆珠质量，ｇ；
ｃ——不圆珠质量，ｇ。
ｈ）将圆珠和不圆珠重新混合均匀； ｉ）步骤ｅ）一ｈ）
重复性用公式（５）表示，测定结果共重复进行三次。
应满足５（５的要求。
（５）Ｒ＝Ｐ一一Ｐｌｎｉ。
式中：尺——三次测定结果的极差，，；
Ｐ一——三次测定结果的最大值，，；
Ｐ。。——三次测定结果的最小值，，。
７（３检定结果的处理 经检定合格的选形器发给检定证书（内容见附录Ａ，内页格式见附
录Ｂ），检定不合格
的选形器发给检定结果通知书，并注明不合格项目。 ７（４检定周期 选形器的检定周期一般不
超过一年。
４
ＪＪＧ（交通）０７３－－２００７
附录Ａ
检定证书内容
ａ）标题，如“检定证书”或“测检定证书应至少包括以下信息：
试证书”； ｂ）实验室名称和地址； ｃ）证书或报告的唯一性标识（如编号），每页及总页数的标识； ｄ）送检单位的名称和地
址；
ｅ）被检对象的描述和明确标识；
ｆ） 进行检定的日期，如果与检定结果的有效性和应用有关时，应说明被检对象的接
收日期；
ｇ）如果与检定结果的有效性和应用有关时，应对抽样程序进行说明； ｈ）对检定所依据的技术规范的标识，包括名称及代号； ｉ） 本次检定所用测量标准的溯源性及有效性说明；
ｊ） 检定环境的描述； ｋ）检定结果及其测量不确定
度的说明；
１） 检定证书或检定报告签发入的签名、职务或等效标识以及签发日期；ｍ）检定结果仅对被检对象有效的声明； ｎ）未经实验室书面批准，不得部分复印证书或报告的声明； ｏ）建议下次检定
日期。
５
２００７ＪＪＧ（交通）０７３
附录Ｂ
检定证书内页格式
检测项目 技术要求 检定结果
振幅调节 ０（０（５ｍｍ
５０Ｈｚ士２Ｈｚ 频率 平板尺寸（长×宽） （３８０？２）ｍｍＸ（１５０？２）ｍｍ Ｏ。，５。 角度调节 重复性要求 重复性测定结果的极差？５，
６
作文九：《喷砂玻璃珠分类》2300字
喷砂用玻璃珠分类及应用 ２０１２－０６－１１ １４：０３：５３
喷砂耗材分为：玻璃珠、玻璃砂、树脂砂、钢砂、棕刚玉、绿碳化硅、黑碳化硅、白刚玉、不锈钢丸、钢丸、黑刚玉、核桃壳、玉米芯等等。今天为大家介绍喷砂玻璃珠：喷砂玻璃珠以压缩空气为隐射动力。将玻璃微珠高速、高压、喷射到工件表面进行喷丸、光饰加工。
·喷砂玻璃珠可以冲锻、段压、玻璃、橡胶塑料、金属铸造、挤压等各种摸具的清理。
·喷砂玻璃珠可以可消除拉应力、增加疲劳寿命和提高抗应力腐蚀能力。如：飞机发动机涡轮、叶片、轴、起落架、各种弹簧、齿轮液压件等。
·喷砂玻璃珠可以电路版块，塑封对管上锡前的清理及去除废边毛刺。
·喷砂玻璃珠可以去除活塞、气缸内的堵塞物。为医疗机械工具和汽车零部件提供明亮半无光泽表面。 ·喷砂玻璃珠可以电动机、大修时的线圈、电刷转子等零部件的清理。
·喷砂玻璃珠可以各种金属管、有色金属精密铸造的清理及去毛刺。纺织机械零部件的喷丸强化和光饰加工。
喷砂玻璃珠可以型号
型号 ３０＃ ４０＃ ６０＃ ８０＃ １００＃ １２０＃ １５０＃ １８０＃ ２２０＃ ２８０＃
Ａ系列道路反光玻璃珠、镀膜珠（反光型）
反光型玻璃珠是道路标线涂料必备材料，主要用于道路标线（热容涂料予混和施工面撒）标志牌，护拦轮廓标，工艺品珠等。镀膜玻璃珠是利用一种高性能的有机矽材料对玻璃珠进行外处理，玻璃珠经过镀膜处理后使用表面存在的强极性基变成非极性基，使得玻璃珠表面吸附空气中的灰尘现象减弱。由于镀膜珠含有特定的偶联剂，改善了微珠和涂料的粘结力能防止部分细小玻璃珠沉积到涂料中。玻璃珠镀膜处理后性能更加优越。
Ａ系列道路反光玻璃珠、镀膜珠参照标准（反光型）
型号 １ 号（ Ａ 类）
目数 ２０ ２０－３０ ３０－６０ ６０ 下
２ 号（ Ｂ 类）
２０ ２０－３０ ３０－６０ ６０－１４０
粒径 μ ｍ ８５０ ８５０－６００ ６００－３００ ３００ 下 ８５０ ８５０－６００ ６００－３００ ３００－１０６
百分比含量 ％
０ ５－３０ ３０－８０ ０－５ ０ ５－３０ ３０－８０ １０－４０
目数 ２０－４０ ３０－４０ ４０－６０ ６０－１００ ７０－１４０ １００－１４０ １００－２００ １４０－２００ １４０－２７０ ２００－３２５
粒径 μｍ ８５０－４２５ ６００－４２５ ４２５－３００ ３００－１５０ ２１２－１０６ １５０－１０６ １５０－７５ １０６－７５ １０６－５３ ７５－４５
１４０
３ 号（ Ｃ 类）
３０ ３０－６０ ６０－１００ １００
砂磨用玻璃珠 型号（一）
ＧＪ－１ （普通型） 透明度好、化学性能稳定、成本低、适合于一般物料的研磨，也可用作喷丸珠、反光珠 型号（二）
ＧＪ－２ （增强型） 硼硅酸盐玻璃珠，韧性１５４
化学成分
二氧化硅、三氧化二铝、氧
化学成分
二氧化硅、三氧化二铝、
１０６ ６００ ６００－３００ ３００－１５０ １５０
０－５ ０ ４０－９０ ５－６０ ０－５
物理性
比重： ２．５ｇ／ｃｍ ３
规格（ ｍｍ ） ф ０．６－０．８ ф ２．０－２．５ ф ０．８－１．０ ф ２．５－３．０ ф １．５－２．０ ф ３．５－４．０
氧化钙、氧化镁、氧化钠 假比重： １．５ｇ／ｃｍ ３
显微硬度：≧ ６８０ｋｇ／ｍｍ ２ ф １．０－１．５ ф ３．０－３．５
物理性
比重： ２．５ｇ／ｃｍ ３ 假比重： １．５ｇ／ｃｍ ３ ２
规格（ ｍｍ ） ф ０．６－０．８ ф ２．０－２．５ ф ０．８－１．０ ф ２．５－３．０ ф １．５－２．０ ф ３．５－４．０
好、耐磨耗、化学稳定性好。 化钙、氧化钡、氧化钠、三ＰＨ 值 ＝７．２ ，适合于中、氧化二硼 低粘度物料的研磨，也可用于喷丸珠 型号（三）
ＧＪ－３ （耐磨型） 化学稳定性好、适合于中高粘度物料、高固成份物料及超细磨的干磨、湿磨 型号（四）
ＧＪ－１ （高白型） 无色、透明、磨耗低、化学稳定性好、适用于研磨高档及纯白色物料
化学成分
二氧化硅、三氧化二铝、氧化钛
化学成分
显微硬度：≧ ６８０ｋｇ／ｍｍ ф １．０－１．５ ф ３．０－３．５
物理性
比重： ２．８ｇ／ｃｍ ３
规格（ ｍｍ ） ф ０．６－０．８ ф ２．０－２．５ ф ０．８－１．０ ф ２．５－３．０ ф １．５－２．０ ф ３．５－４．０
比重大、强度高、磨耗低、二氧化硅、三氧化二铝、
氧化锆、氧化钛
氧化钙、氧化镁、氧化钠、假比重： １．６５ｇ／ｃｍ ３
显微硬度：≧ ７２０ｋｇ／ｍｍ ２ ф １．０－１．５ ф ３．０－３．５
物理性
比重： ２．７ｇ／ｃｍ ３
规格（ ｍｍ ） ф ０．６－０．８ ф ２．０－２．５ ф ０．８－１．０ ф ２．５－３．０ ф １．５－２．０ ф ３．５－４．０
氧化钙、氧化镁、氧化钠、假比重： １．６ｇ／ｃｍ ３
显微硬度：≧ ７００ｋｇ／ｍｍ ２ ф １．０－１．５ ф ３．０－３．５
法国西普氧化锆珠（陶瓷珠、锆珠）包装说明： ２０ｋｇ／ 桶
产品规格： ０．５－０．７－０．９－１．１－１．４，１．３－１．６－１．９－２．５ｍｍ
详细说明：氧化锆珠 Ｚｉｒｍｉｌ 由一种独一无二的钇稳定锆粉 ， 通过特殊工艺加工制成。 能最大限度地提高研磨效率和极微的介质损耗。 理论比重： ５．９ｋｇ／ｌ 堆积比重： ３．６ｋｇ／ｌ 抗压强度： １２００Ｎ
主要规格 （ｍｍ） ： ０．５－０．７－０．９－１．１－１．４ ； １．３－１．６－１．９－２．５
化学成分： ＺｒＯ２ ： ９３％ Ｙ２Ｏ３ ： ５％ 其它： ２％
喷砂玻璃珠可以应用说明：产品广泛应用于油墨，涂料，染料，颜料，化妆品，矿物，电子陶瓷等物料的超细研磨与分散及各种铸件的抛丸及喷砂处理
作文十：《玻璃珠转化法》7100字
２００８年６月第４５卷第３期
ＪｏｕｒｎａｌｏｆＳｉｃｈｕａｎ
四川大学学报（自然科学版）
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＥｄｉｔｉｏｎ）
Ｊｕｎ．２００８
Ｖ０１．４５
Ｎｏ．３
文章编号：０４９０．６７５６（２００８）０３．０６９４．０５
莱茵衣藻玻璃珠法快速转化检测体系的建立
黄
非，黄
秦，黄
敏，易秀丽，郑红波，乔代蓉，曹
毅
（Ｉ匹ＩＪＩＩ大生命科学学院四川省生物信息与代谢工程共享实验平台，成都６１００６４）
摘要：为了建立在衣藻中快速简便研究外源基因功能的方法，采用玻璃珠转化法将ｐＢｌ２２１质，ａ（３５ｓ，Ａｍｐ，ＧＵＳ）高效转化至细胞壁缺陷型衣藻品系Ｃ＇Ｗ－１５（Ａｒｇ一），通过对转化条件及ＧＵＳ表达检测条件摸索，发现３５Ｓ启动子在ＣＷ一１５中能有效启动ＧＵＳ表达。且ＧＵＳ最佳检测时间约为转化后２４ｈ，重组细胞先染色后制片更有利于ＧＵＳ检测．关键词：莱茵衣藻；转化；ＧＵＳ；瞬时表达中图分类号：Ｑ７８
文献标识码：Ａ
Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆ
ａ
ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔｍｅｔｈｏｄｆｏｒＣｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａ￥
ｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉｇｌａｓｓ—ｂｅａｄｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎａｓｓａｙ
ＨＵＡＮＧＦｅｉ，ＨＵＡＮＧＯｉｎ，ＨＵＡＮＧＭｉｎ，ＹＩ
（Ｓｉｃｈｕａｎ
Ｐｕｂｌｉｃ
Ｘｉｕ—Ｌｉ，ＭＡ
Ｇｅｎ，ＱＩＡＯＤａｉ—Ｒｏｎｇ，ＣＡＯＹｉ
ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＰｌａｔｆｏｒｍｏｆＢｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｚａｎｄＭｅｔａｂｏｌｉｃＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，
ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＳｉｃｈｕａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｅｎｇｄｕ６１００６４，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｆｉｎｄ
ａ
ｗａｙｏｆｓｔｕｄｙｉｎｇｔｈｅｈｅｔｅｒｏｇｅｎｏｕｓｎｕｃｌｅａｒｓｅｇｍｅｎｔｓｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｉｎｔｏＣｈｌａｍｙ－
ｄｏｍｏｎａｓｒｅｉｎｋａｒｄｔｉｉ，ｐＢｌ２２１ｗａｓｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｉｎｔｏＣｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓｒｅｉｎｋａｒｄｔｉｉｓｈｏｗｅｄｔｈａｔ３５Ｓｐｒｏｍｏｔｅｒｃｏｕｌｄｎａｔｕｒａｌｌｙ２４ｈｏｕｒｓａｆｔｅｒ
ｃａＬｌｓｅ
ＣＷ．１５，ｗｉｔｈｏｕｔ
ａｓｓａｙ
Ａｒｇ．Ｉｔｉｓｗａｓａｂｏｕｔ
ＧＵＳｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．ＴｈｅｂｅｓｔｔｉｍｅｐｏｉｎｔｏｆＧＵＳ
ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ．Ｔｒａｎｓｆｏｎｍｎｔ
ｗａｓ
ｓｔａｉｎｅｄ
ｂｅｆｏｒｅｒｏｏｔｉｎｇｃｅｌｌｓ
ｏｎ
ｖｉｔｒｅｏｕｓｓｌｉｃｅ．ＩｔｉＳｂｅｔｔｅｒｔｈａｎ
Ｊｅｆｆｅｒｓｏｎ’ｐｒｏｔｏｃ０１．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｃｈｌａｍ３ｄｏｎｍｎａｓ
ｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉ，ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ，ＧＵＳ，ｉｎｓｔａｎｔａｎｅｏｕｓ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
１前言
莱茵衣藻（Ｃｈｔａｍ＃ｏｍｏｎａｓｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉ）是一种单细胞淡水藻，因其结构简单，生命周期和遗传背景明晰，现已在鞭毛结构与功能，质体遗传和演
化，细胞识别以及色素感光等方面取得许多极富代
酸缺失细胞壁缺陷型（ＣＷ．１５，Ａｒｇ一）广泛应用在
衣藻转化研究中．当前常用的衣藻转化方法有基因枪转化，电击转化和玻璃珠转化［２，３１．其中，玻璃珠
法转化衣藻原生质体操作简单，转化率高而被普遍应用．早期实验结果表明，衣藻转化子的产生同藻体生长程度及载体与藻体的比例有密切联系：用玻
表性的研究结果，使得莱茵衣藻成为藻类研究中的
模式物种…１．
当前在衣藻中表达外源基因已有很多成功范例，得益于衣藻中有一类基因缺陷导致细胞壁缺
璃珠法转化衣藻时，选取指数生长期的衣藻个体（１
ｘ
１０６／ｍＬ），载体与藻体数量比为２耀：３
ｘ
１０７个
时转化效果最佳【２，４｜．
通过抗性基因筛选阳性克隆子已见报道，但所用抗性基因均与衣藻内源启动子及内源终止子构
失，使得这类衣藻个体成为原生质体，其中的精氨
收稿日期：２００７－０９．１７；修回日期：２００７．１０一０６
基金项目：国家自然科学基金（３０５００２８７。３０６７１１２５，３０４７０９２８），四川省杰出青年基金（０５ＺｑＤ２６Ｊ０２９）作者简介：黄非（１９８２一），男，２００５级硕士研究生，研究方向为微生物分子生物学．通讯作者：曹毅．Ｅ－ｍａｉｌ：ｃａｏｘｈ＠、，ｉｐ．ｓ；Ｉｌａ．ｃｏｒｎ．ａ１
第３期黄非等：莱茵衣藻玻璃珠法快速转化检测体系的建立
６９５
成固定表达框结构（如ｐＳＰ系列载体），因为抗性基因需要在持续表达的情况下才可以作为筛选标
吲哚葡萄糖苷Ｘ—Ｇｌｕｅ（Ｓｉｇｍａ）；聚乙二醇ＰＥＧ６０００（Ｓｉｇｍａ）；二甲基甲酰氨、Ｎａ３Ｐ０４、精氨酸（中国药业集团）；ＴＵ－１８００紫外可见分光光度计；Ｕｖ－７５４分光光度计；ＯｌｙｍｐｕｓＢＨ－２显微镜．
记．这种整合结构对于衣藻转化体系而言成为一种
局限：固定的表达框结构虽然使得其中的基因稳定表达，但是这样的结构不易容纳外源片段，造成了
２．１．４培养基ＴＡＰ培养基（Ｌ）：ｒｑＨ４Ｃ１
ＭｇＳ０４‘７Ｈ２０
Ｋ２ＨＰ０４０．０９３５
０．１
ｇ；ＣａＣｌ２。２Ｈ２０
０．４ｇ；
ｇ；
其本身适用范围的限制，且ｓａｕｌ等人的研究表明，广泛使用的衣藻抗性基因ｂｌｅ在融合表达其他蛋
白的情况下失活，引起阳性子筛选标记失灵等负面结果．
因此本文拟建立简便检测生长密度方法并设计用玻璃珠法转化具有３５Ｓ启动子及ＧＵＳ标记基因的ｐＢｌ２２１质粒，解决衣藻载体的普遍性问题．鉴于不同载体在转化条件上的差别，参考文献中的优化条件，组合了一系列实验探索适合ｐＢｌ２２１质粒的转化条件并根据３５Ｓ启动子在衣藻中瞬时表达。且ＧＵＳ显色检测对原生质体破坏较大的缺点【５Ｊ，着重找寻３５Ｓ启动子瞬时表达的检测时间及在ＣＷ一１５转化子中ＧＵＳ蛋白活体染色的合适方法．
０．０６５
ｇ；ＫＨ２Ｐ０４０．０６２ｇ；ＭｇＳＣ）４?７Ｈ２０
０．２４６５ｇ；Ｔｒｉｓ－ｂａｓｅ２．４２３ｇ；Ｈｕｔｎｅｒ’ｓｔｒａｃｅｅｌｅｍｅｎｔ１ｍＬ．
２．２方法
２．２．１
莱茵衣藻生长密度测定通过ＴＵ．１８００
紫外可见分光光度计全波段扫描，确定莱茵衣藻ＣＷ一１５品系的最大吸收峰．取活跃生长期（悬浮生长，还未出现沉淀细胞）的ＣＷ一１５培养液，通过
ＵＶ－７５４分光光度计测定不同生长程度ＣＷ－１５培
养液在最大吸收峰下的吸光度并与血球记数板测定的藻体密度相对应，每个样品平行测定３次，取平均值描绘生长密度同吸光度对应关系曲线．２．２．２玻璃珠法转化衣藻【２，４］
衣藻培养到对数
ｍＬ—
２材料和方法
２．１材料
２．１．１
生长期，取３ｍＬ培养液预处理，离心，用０．３
ＴＡＰ培养基重悬细胞；Ｋｉｍｂｌｅ
种
莱茵衣藻精氨酸缺陷型
ＣＷ－１５，ＡＩｇ一，由南开大
入２
ｂｔｇ
Ｔｕｂｅ中加入３００
（０】妇蚴疡删ｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉ
室保存）；
藻
ｍｇ灭菌并烘干的玻璃珠，倒人０．３ｍＬ重悬液，加
ｐＢｌ２２１质粒并加入添加剂，置于旋涡震荡
学慧赠），ＴＡＰ培养基（含１％精氨酸）中培养；２．１．２质粒ｐＢｌ２２１（Ｅ．ｃｏｌｉＪＭｌ０９，本实验２．１．３试剂和仪器ＫｉｍｂｌｅＴｕｂｅ（德记仪器有限公司）；玻璃珠（直径０．５ｍｎｌ，Ｓｉｇｍａ）；５一溴一４一氯一３一
器上充分震摇．转化后的细胞加入到５０ｍＬ新鲜
ＴＡＰ培养基（含０．１％精氨酸），暗光培养（共设置
８种转化条件，详见表１）．转化后１２，２４，３６ｈ分别
取样染色镜检，以确定口Ｊｓ检测时间．
表１转化条件
Ｔａｂ．１
Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ
６９６
四川大学学报（自然科学版）
阳性克隆子检测
参考Ｊｅｆｆｅｒｓｏｎ的ＧＵＳ
第４５卷
２．２．３
标准检测法稍作改动吲５，选用Ｘ－Ｇｌｕｃ染色对衣藻
中表达的ＧＵＳ蛋白进行检测．取转化后的培养液
１
ｍＬ，离心，用５００ＩｕＬ染色液（５ｍｇＸ．Ｇｌｕｃ溶解
主
＿
于１００肚Ｌ二甲基甲酰氨，加入ｐＨ７．０的５０
ｍｍｏｌ／ＬＮａ３Ｐ０４至５～１０ｍＬ）重悬细胞，３７℃敞
２
《－Ｖ蜊襁投麟
口温育３０ｍｉｎ，制作涂片镜检（每个样品重复三次）．由于ｐＢｌ２２１在衣藻中不能稳定遗传，因此转化子在转化后培养液中零星分散，不同的转化率表现为在多次镜检中检出蓝色细胞的频率．３
结果
图１
Ｆｉｇ．１
ＣＷ．１５生长密度与吸光度对应关系曲线
３．１莱茵衣藻ＣＷ－１５生长密度与吸光度关系
通过对衣藻Ｃｗ．１５品系细胞的全波长扫描发
Ｃｕｒｖｅｏｆｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎｃｏｎｓｉｓｔｅｎｃｙａｎｄ
ＯＤ
ｖａｌｕｅｏｆＵＶ—ｖｉｓｉｂｌｅａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ（３９５ｒｔｌＴｌ）ｏｆ
现，其最大吸收峰约为３９５衄．在此波长下对６个
不同生长时期样品光吸收值及对应生长密度，绘制特征生长密度与吸光度关系曲线（图１）．推导公式可得，当藻体密度达到１０６／ｍＬ时，培养物３９５吸光度应达到０．７５．
３．２
ｎｌＴｌ
ＣＷ．１５
ＧＵＳ基因转化杜氏盐藻Ｄ．ｓａｌｉｎａ相似；１２ｈ后样品中未检出阳性克隆子；而３６ｈ后样品中阳性克隆子开始出现降解（如图２（ｂ）所示）．３．３最佳转化条件
对８组不同转化条件样品转化后２４ｈ取样制片检测阳性子，比较转化率（表２）．
ＧＵＳ蛋白检测时间
采用ＫＬ．Ｋｉｎｄｌｅ的转化条件［２］２进行衣藻转
化．转化２４ｈ后能发现较多的阳性克隆子，胞内ＧＵＳ蛋白染色清晰（如图２（ａ）所示），该结果与
图２转化后不同时间ＧＵｓ表达检测
Ｆｉｇ．２
Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅｉｎ－ｌａｇｅｏｆｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｓａｍｐｌｅｇｏｉｎｇｔｈｒｏｕｇｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｘｘｌｒｓ
（ａ）ｗ诅ｓ２４ｈｏｕｒｓｄｔｅｒｔｎｍｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ；（ｂ）ｗａｓ３６Ｉｒｘｌｒａ
表２不同转化条件阳性子的镜检数目（个）
Ｔ曲．２处理编号第一次记数第二次记数
Ａｍｏｕｎｔｏｆｐｏｓｉｔｉｖｅｃｌｏｎｅｓｕｎｄｅｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓａｃｃｏｒｄｉｎｇ
１３３
２００００
３００００
４２
５２２１１．６７
６４３４３．６７
ｔｏ
ｍｌｃｒｏｓｏｏｐｅ
８００１０．３３
７１０１０．６７
第三次记数４平均数
３．３
第３期黄非等：莱茵衣藻玻璃珠法快速转化检测体系的建立
６９７
图３不同转化条件的转化效率比较
Ｆｉｇ．３
Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅｉ１１］ｆｌｇｅｏｆｓａｍｐｌｅｓｕｎｄｅｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ
Ａ．嘲ｆｒｏｍ
ｓａｍｐｌｅ７；Ｂ．ｗａｓｆｒｏｍｓａｍｐｌｅ５；Ｃ．ｗ笛ｆｒｏｍｓａｍｐｌｅ４；
Ｄ．ｗａｓｆｒｏｍｓａｍｐｌｅ１；Ｅ．ｗａｓｆｒｏｍｓａｍｐｌｅ６；Ｆ．ｗａｓｃｏｎｔｒｏｌｓｍａｐｌｅ
仅有处理样品２、３没有检出转化子，处理样品８有少量转化子，细胞均呈现裂解形态，多为绿色或无色细胞碎片；处理样品７能检测出转化子，但视野中出现大量细胞碎片，完整细胞数量明显少于
期，即细胞密度应达到艿≥１０６／ｍＬ，光线充足所培
养的个体生理代谢旺盛，个体活力高，成熟个体在培养物中占的比例较大，这些生理特性都有利于转化效率的提高．ＣＷ．１５品系缺乏细胞壁，在转化过程中借助玻璃珠振荡的瞬间剪切力”撕开”细胞膜，促使质粒进入细胞，这对细胞本身是一种较大的物理伤害．个体小的细胞不容易被转化，只有成熟的个体较大细胞能相对容易接受外源质粒，并能在转
化后顺利表达ＧＵＳ基因．因此衣藻培养着重于个体活力的提高：接种种源应为固体培养基上的单克隆个体，光照强度适当加大，光照时间比自然时间
其他处理（图３．Ａ）；处理样品５（图３．Ｂ）转化率与处理样品４（图３．Ｃ）基本相当，但完整细胞数量明显少于处理样品４；处理１（图３．Ｄ）转化率明显高于处理样品４，视野中较容易发现蓝色转化子；处理样品６（图３．Ｅ）转化率以及细胞完整性都比较
理想，多次重复均证实该结果，因此将处理６转化条件定为本实验中ｐＢｌ２２１转化ＣＷ－１５的最佳条件．
更长，适当振荡培养基增加溶氧，力求提高培养物
个体活力．
４讨论
４．１衣藻个体活力对转化率影响
莱茵衣藻生长到对数期是用于转化的最佳时
本文选择测定生长密度同吸光度关系曲线取代生长曲线是出于ＣＷ．１５品系的特殊生长特征．
该品系是营养缺陷型（Ａｒｇ一），生长速度和个体活
６９８
四川大学学报（自然科学版）第４５卷
力都不如野生型，并且在培养过程中发现，相同培养条件和近似接种量下各批次生长情况都有差异，
所测定生长曲线重复陛差．而生长密度同吸光度关系曲线的确定很好的解决了简单测定藻体密度问题，值得注意的是，应选择悬浮生长，还未出现沉淀
细胞的ＣＷ一１５培养液进行实验，这样才能保证藻体处于活跃生长期．
４．２预处理及添加剂对转化率的影响
衣藻转化预处理主要集中在３７℃温育及５％ＰＥＧ６０００处理（振荡前离心清除），目的都是提高细胞膜的通透性．ＰＥＧ是一种广泛使用的细胞膜融合促进剂，在高等植物原生质体转化的处理中，ＰＥＧ是一种常用的细胞膜”疏松剂”，它通过改变膜蛋白的构象降低膜蛋白和膜脂的相互作用达到增加膜通透性的目的，温育也能达到类似的效果，但是ＰＥＧ作用后的细胞似乎在生理活力上要弱于温育处理细胞，表现为细胞在转化过程中易碎【６’７Ｊ，加之其他一些原因导致ＰＥＧ预处理细胞转化率提高不明显．从实验结果看，适度的３７℃温育能有比较理想的效果．添加剂选用ＰＥＧ６０００Ｅ４Ｉ，添加到振荡混合液中，终浓度为５％，在转化后离心清除．同预处理目的一样，希望通过ＰＥＧ在振荡ｐＢｌ２２１作为衣藻载体的优势
实验结果表明，即使ｐＢｌ２２１不具有衣藻内源
ｈ内检测，相比在转化７２ｈ以后才Ｓ启动子简单Ｓ启动子在植物中能广泛的启动下
ＧＵｓ作为标记基因表达的ＧＵＳ蛋白对衣藻物作用后直接制片观察．ＧＵＳ蛋白同其他基因蛋白有很好的融合性，可广泛作为其他基因融合表达的有效组分．但对于衣藻Ｃｗ一１５而言，Ｘ－Ｇｌｕｃ染色液会造成细胞体的死亡，并可由其中的二甲基甲酰氨等组分长时间作用造成细胞裂解，在一定程度上影响观测结果，因此，染色手段非常重要，对于衣藻ＣＷ－１５品系转化子，染色３０ｍｉｎ能保证染色充分以及不致破坏细胞．先染色，后制片也是解决这一问题的有效手段，较之先制片后染色，能使染色的时间缩短，减少制片过程中加热固定对细胞的破坏，提高阳性子检出率．
致谢本实验藻种由南开大学白艳玲教授惠赠；
德国Ｒｅｇｅｎｓｂｕｒｇ大学ＷｏｌｆｇａｎｇＭａｇｅｓ教授给予建设性建议；四川大学生命科学学院何兴金教授，周颂东副教授提供显微镜拍摄，在此一并表示感谢！
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ａｔｅｄ
ｐｌａｓｔｉｄｔｌａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ：ａｎｅｗ
ｓｙｓｔｅｍ
ｆｏｒｔｒａｎｓｉｅｎｔ
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Ｈ
Ｕ．Ｓｔａｂｌｅｐｌａｓｔｉｄｔｒａｎｓｆｏｒ．
ｍａｒｉｏｎｉｎＰＥＧｆｆｅａｔｅｄｐｍｔｏｐｌａｓｔｓｏｆｎｉｃｏｔｉａｎａｔａｂａｃｕｍ
［Ｊ］．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９９３（１１）：９５．
［责任编辑：白林含］
过程中作用细胞膜蛋白，协助质粒顺利转化．但实验结果显示该手段对于细胞破坏性较强，比用ＰＥＧ预处理所造成的细胞碎片数量更大，且在本
实验中在添加ＰＥＧ的振荡样品中未检测到阳性克
隆子，推测此法并不太适用于衣藻原生质体．
４．３
启动子及内源终止子构成的整合结构，但３５Ｓ启动子可以在衣藻ａＶ．１５中正常启动下游ＧＩＪｓ基因表达，并能在２４可整合表达的衣藻内源启动子，３５快捷．另外，３５游基因表达，因此可以作为衣藻表达体系同植物表
达体系穿梭表达载体．
是一种无毒害的蛋白，可以在胞体内积累而不流失或分解．ＧＵＳ蛋白可以通过相关底物反应并测定
光吸收值方便精确地定量测定，与此同时，ＧＵＳ蛋白可以在细胞活体中原位染色，通过Ｘ－Ｇｌｕｅ等底
